एलिसा किट परीक्षण आवश्यकताएँ

औपचारिक परीक्षण में एक अच्छा कंट्रास्ट करें, परीक्षण की स्थिति को सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण में लिया जाना चाहिए, और परीक्षण के परिणामों की सटीकता सुनिश्चित करने के लिए परीक्षण किए जाने वाले नमूनों को दो प्रतियों में बनाया जाना चाहिए।

कभी-कभी पृष्ठभूमि अधिक होती है, जो एक गैर-विशिष्ट प्रतिक्रिया का संकेत देती है, इसे भेड़ सीरम, खरगोश सीरम या बीएसए द्वारा बंद किया जा सकता है।

प्रायोगिक स्थितियों का चयन

एलिसा में, विभिन्न प्रायोगिक स्थितियों का चयन करना महत्वपूर्ण है, जिनमें शामिल हैं: (1) ठोस चरण वाहक का चयन: कई पदार्थों का उपयोग ठोस चरण वाहक के रूप में किया जा सकता है, जैसे कि पीवीसी, पॉलीस्टाइरीन, पॉलीएक्रिलामाइड और सेलूलोज़। यह अवतल प्लेट, टेस्ट ट्यूब, बीड आदि का रूप ले सकता है। वर्तमान में, इसका उपयोग आमतौर पर 40-वेल पॉलीस्टाइनिन अवतल प्लेटों के लिए किया जाता है।

कोई फर्क नहीं पड़ता कि किस प्रकार का वाहक, उपयोग से पहले जांच की जा सकती है: एंटीजन पैकेज की समान मात्रा के साथ, प्रतिक्रिया करने के लिए समान प्रयोगात्मक स्थितियों के तहत, यह देखने के लिए कि क्या इसकी रंग प्रतिपादन प्रतिक्रिया एकरूपता है, जिसके अनुसार यह अच्छा सोखना प्रदर्शन है। (2) एंटीबॉडी (या एंटीजन) चयन द्वारा पैकेज: एंटीबॉडी (या एंटीजन) को ठोस चरण वाहक की सतह पर सोख लिया जाता है, आवश्यकता की गंभीरता बेहतर होती है, सोखने के लिए आम तौर पर 9.0 से 9.6 के बीच पीएच की आवश्यकता होती है। सोखने का तापमान, समय और प्रोटीन की मात्रा का भी एक निश्चित प्रभाव पड़ता है, आम तौर पर 18 से 24 घंटे में 4 डिग्री सेल्सियस से अधिक। प्रोटीन पैक की इष्टतम सांद्रता को शीर्षक देने की आवश्यकता है: विभिन्न प्रोटीन सांद्रता (0.1, 1.0 और 10 ग्राम/एमएल, आदि) के साथ पैक किए जाने के बाद, सकारात्मक नमूनों के ओडी मान तब देखे जाते हैं जब अन्य परीक्षण स्थितियां समान होती हैं। सबसे बड़े OD मान और सबसे कम प्रोटीन मात्रा वाली सांद्रता का चयन करें।

अधिकांश प्रोटीन के लिए, यह आमतौर पर 1 से 10 ?g/ml होता है। (3) एंजाइम लेबल वाले एंटीबॉडी कार्यशील एकाग्रता का चयन: सबसे पहले, प्रत्यक्ष एलिसा विधि का उपयोग करके अनुमापन का प्रारंभिक प्रभाव (एंजाइम लेबल एंटीबॉडी भाग देखें)।

फिर अन्य स्थितियों को ठीक करें या औपचारिक प्रयोगात्मक प्रणाली में "स्क्वायर एरे विधि" (पैक नुकीला, जांच किए जाने वाले नमूने के लिए संदर्भ, और एंजाइम -लेबल एंटीबॉडी अलग-अलग कमजोर पड़ने वाले होते हैं) को अपनाएं, इसकी कार्यशील एकाग्रता को सटीक रूप से शीर्षक देता है। (4) एंजाइम के आधार और हाइड्रोजन दाता का चुनाव: हाइड्रोजन दाता का चुनाव सस्ता, सुरक्षित, स्पष्ट रंग प्रतिपादन प्रतिक्रिया वाला और स्वयं रंगहीन होता है। कुछ हाइड्रोजन दाताओं (जैसे ओपीडी, आदि) में संभावित कैंसरकारी प्रभाव होते हैं, सुरक्षा के लिए सावधानी बरतनी चाहिए। सशर्त लोगों को गैर-कार्सिनोजेनिक, उच्च संवेदनशीलता वाले हाइड्रोजन दाताओं, जैसे टीएमबी और एबीटीएस का उपयोग करना चाहिए, वर्तमान में अधिक संतोषजनक हाइड्रोजन दाता हैं। क्रिया की अवधि के बाद, प्रतिक्रिया को रोकने के लिए मजबूत अम्ल या क्षार मिलाया जाना चाहिए। आमतौर पर सब्सट्रेट क्रिया का समय 10-30 मिनट तक उपयुक्त होता है। सब्सट्रेट उपयोग तरल पदार्थ को ताज़ा तैयार किया जाना चाहिए, खासकर यदि उपयोग से पहले H2O2 जोड़ा गया हो।